己酸菌和丁酸菌是嫌气性的梭状芽抱杆菌。当培养这些菌时，首先要驱除培养容器中的大量空气，一般有抽气法和化学除气法两种。空气对梭状芽孢杆菌孢子的毒性很大，孢子一旦发芽成为营养体后，空气对其毒性就小了。这两类细菌已广泛地应用于浓香型曲酒和液态法白酒生产，主要发酵产物为丁酸和己酸。
　　1.丁酸菌的分离培养
　　(1)实验材料
　　①菌种：分离源为浓香型曲酒发酵窖泥。
　　②培养基：
　　a.葡萄糖豆芽汁：葡萄糖5g， 豆芽汁100ml， 于58.84kPa下， 灭菌15min。
　　b.碳酸钙萄糖豆芽汁：葡萄糖10g加人100ml豆芽汁中， 于58.84kPa下灭菌15min，然后加入5g已干热灭菌的CaCＯ3， 常压灭菌30min。
　　c.葡萄糖牛肉汁：
　　葡萄糖　30g　牛肉汁(或牛肉膏)　15g(8g)
　　蛋白胨　0.15g　氯化铁　　　　　0.5g
　　氧化钠　5g　　磷酸氢二钾　　　　1g
　　硫酸镁　0.1g
　　水　　　1000ml　58.84kPa，灭菌15min
　　(2)操作步骤
　　①将装有葡萄糖豆芽汁的三角瓶置于火上，去塞煮沸片刻，掷人客泥少许.继续煮沸4-5min。去火， 加塞冷却至35℃， 培养2天， 用厌氧法分离， 镜检细菌形状及大小。
　　②将分离到的丁酸菌接种子碳酸钙葡萄糖豆芽汁中，称瓶重。40℃下培养14天后，再称瓶重，瓶的减轻量是因生成氢气及CO₂所致。瓶的减轻量越大，说明该瓶内的细菌发酵力越强。
　　③取发酵液5ml、滤纸过滤， 将滤液2ml加人小型试管中， 再加CuCl₂-HCl液0.5ml，混合均匀，加氯仿1ml.用指压管口上下翻动10次，摇匀，然后静置于试管架上。管口液体应分两层，下层为溶解丁酸铜的氯仿液。氯仿液若为无色，说明丁酸很少或没有，蓝色或绿色越浓，则说明丁酸含量越多。
　　④将含有丁酸盐的发酵液全部滤过，将洗净的滤液及洗液蒸发浓缩，丁酸钙结晶成磷片状先析出，趁热滤过，烤干、得粗丁酸钙，称重，计算每100g葡萄糖可得粗丁形钙的克数。
　　(3)丁酸菌的培养
　　①试管培养：采用上述葡萄糖牛肉汁培养基，将砂土管菌种活化1-2次，于35-37℃下接人液体试管，24~36h后当液面出现一层菌膜，但无大量气泡产生时，移人三角瓶。
　　②三角瓶培养：采用上述培养基，于500ml三角瓶中装培养基250ml，灭菌，冷却后接种10%，在嫌气条件下培养，温度为35-37℃，培养24-36h。为保证嫌气条件，三角瓶口可塞一带玻璃管的橡皮塞，玻璃管的另一端通入另一个装水的三角瓶中，进行水封。
　　③卡氏罐培养：
　　培养基：玉米面加麸皮10%，加水2-13倍。
　　常压糊化培养基1h，冷至58~60℃，加曲10%，糖化3~4h糖化后加1%碳酸钙，0.25%硫酸铵， 浓度7~8°Bé。装入卡氏罐， 0.11MPa压力灭菌30min， 冷至35~37℃、接种10%，35-37℃水封培养24-36h。
　　2.己酸菌的分离培养
　　(1)分离方法
　　①培养基：
　　醋酸钠　0.5%　　酒精　2%（单独灭菌，接种前加入）
　　硫酸镁　0.02%　　硫酸铵　0.05%
　　碳酸钙　1%(分消)　酵母膏　0.1%
　　pH　　　6.8~7.0　磷酸氢二钾　0.04%
　　②种源：百年老窖泥或优质池底泥。
　　③分离方法：采用厌氧法分离。
　　(2)己酸菌的扩大培养
　　①培养基：
　　种子用培养基：采用上述合成培养基。
　　发酵用培养基：
　　酒糟浸液30%　窖泥5%
　　黄浆水10%　　曲粉2%
　　酒精2%(或酒尾，按酒精含量折算)
　　pH　5~6
　　②培养步骤：砂土管→液体试管→平底烧瓶(或三角瓶)→细口瓶→大坛(或罐)。
　　每级接种量为10%，培养时间7-9天，培养温度34-36℃。
　　为保证厌氧条件，每代培养基必须装满容器，高液面培养、并用酒精封口，瓶口可用塑料布包封。注意不要染菌。
　　己酸菌培养易发生氨细菌污染，使发酵液变黑、恶臭，己酸产量大幅度下降。为了避免这种情况，各级培养必须严格操作，并可适当加大接种量。
　　生长良好的己酸菌，可在培养液中见到较好的分层，有己酸特有的气味，产生细小的气泡(H₂)，表面不形成浮膜。